数字PCR技术服务
来源：本站 作者：jiyuanbio 时间：2025/5/23
一、数字 PCR 技术的应用方向
- 肿瘤学研究
- 基因突变检测：在肿瘤精准医学的伴随诊断中，可精准检测如 TP53 R175H、EGFR L858R 等肿瘤驱动基因的点变异。相较于二代测序技术，数字 PCR 灵敏度可达 0.01% 甚至 0.001%，对低频突变检测与定量更具优势 。在 “液态活检” 中，能有效减少正常体细胞 DNA 干扰，精准检测痕量的循环肿瘤 DNA（ctDNA） 。
- 拷贝数变异（CNV）检测：异常 CNV 是多种人类疾病发生的重要分子机制。数字 PCR 摆脱对 Ct 值依赖，直接获取靶基因绝对拷贝数，检测精度远超二代测序、芯片杂交等技术，可对相关实验结果进行有效验证 。
- 基因融合检测：对非小细胞肺癌患者的 ALK 融合、肺腺癌患者的 ROS1 融合等基因融合检测具有高灵敏度与准确度，能克服免疫组化（IHC）灵敏度低、荧光原位杂交（FISH）耗时久且假阴性概率高等问题 。
- 无创产前诊断
目前基于 NGS 平台的无创产前诊断（NIPT）精确度有限，数字 PCR 的高灵敏度和精准度为其在 NIPT 领域应用奠定良好基础，已在脊髓性肌萎缩、血友病、镰刀型贫血等遗传病的无创产前诊断中展现卓越性能 。
- 传染病检测
- 病毒载量测定：可对病毒载量进行绝对定量，通过检测单位血浆中游离病毒 RNA 拷贝数，提示病毒感染者所处时期、判定疾病进展、监测抗病毒药物疗效及耐药性问题 。
- 病原体检测：在受到污染的食品和供水中，能检测出导致人类疾病的低含量病原体，为食品安全与饮水安全提供保障 。
- 基因表达分析
可提供比实时荧光定量 PCR 更精确的基因差异表达研究，尤其适用于靶基因表达差异微小的情况，如 mRNA、microRNA、lncRNAs 等的表达分析，以及等位基因不平衡表达、单细胞基因表达分析、外泌体核酸分子定量分析等 。
- 其他应用
- 转基因生物检测：实现对植物基因突变和转基因生物的高灵敏度检测和绝对定量，助力农业生物技术领域研究与监管 。
- 环境监测：可检测土壤中经土壤传播的病原体和抗生素抗性基因，评估人类及生态系统暴露风险 。
- 基因编辑验证：针对 CRISPR - Cas9 技术的基因编辑成果，能有效验证基因编辑的成功性，检测脱靶效应 。
二、数字 PCR 技术服务送样流程
- 样本类型及要求
- DNA/cfDNA 样本：DNA 总量一般要求达到 10ng / 反应，浓度≥0.6ng/ul/ 反应，体积≥15ul / 反应 。
- 质粒样本：浓度需清晰标示并标明 “次方”，稀释至 6 次方及以下浓度，送样体积根据实验需求确定 。
- 样本编号与信息
样本应提前规划简洁清晰的编号，确保检测前核对与检测样本无误。同时，需提供详细样本信息，如样本类型、来源、保存条件、预期检测项目等，以便技术人员更好处理与分析样本 。
- 样本运输
根据不同样本类型要求，选择合适运输方式与保存条件。需低温保存的样本，确保运输全程处于规定低温环境，如使用干冰维持低温，防止样本变质影响检测结果 。
- 样本接收与核对
实验室接收样本后，技术人员将严格按照送样信息对样本进行核对，包括样本编号、类型、数量、保存状态等。若发现样本不符合要求，将及时与送样方沟通，协商解决方案 。
- 检测流程启动
核对无误的样本进入数字 PCR 检测流程，包括核酸提取、反应体系配制、PCR 扩增、荧光信号检测与数据分析等步骤，最终为客户提供准确可靠的检测报告 。
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